乙型脑炎病毒NS1蛋白与宿主蛋白互作的分子机制

项目名称： 乙型脑炎病毒NS1蛋白与宿主蛋白互作的分子机制

项目编号： No.31272563

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 农业科学

项目作者： 亓文宝

作者单位： 华南农业大学

项目金额： 82万元

中文摘要： 乙型脑炎是一种重要的人兽共患传染病。NS1蛋白在病毒的复制、免疫保护、神经侵染性和致病性方面都有重要作用。迄今为止，NS1蛋白的大部分作用机制还不清楚。本研究拟通过一种新型高效的研究蛋白互作的方法，利用Strep标签标记的JEV复制子及JEV感染性cDNA克隆，通过Pull Down技术和LC-MS/MS分析，鉴定与NS1蛋白互作的宿主蛋白，建立相关的蛋白互作网络；进一步通过针对相关蛋白的RNAi和过表达方式，系统研究相关蛋白在JEV生命周期中的作用；利用丙氨酸扫描诱变技术确定NS1蛋白的互作功能区域，通过对相关功能区域的修饰，在体内和体外评估其功能。揭示乙型脑炎病毒NS1蛋白与宿主蛋白的互作网络和分子机制，为该乙型脑炎的基础研究和综合防控提供科学数据和技术支持。

中文关键词： 乙型脑炎病毒；NS1 蛋白；蛋白互作；反向遗传系统；分子机制

英文摘要： Japanese encephalitis virus(JEV) is an arbovirus maintained in a zoonotic cycle,which has assumed increasing public health importance. NS1 protein is a critical factor on virus replication, immunology protection, neuroinvasiveness and pathogenic consequence.Until nowadays, the most mechanism of NS1 protein is uncertain.We thus develop a new strategy based on Japanese Encephalitis virus replicon and infections cDNAs labled by Strep-tag. This allows NS1-Host protein complex analysis directly from transfected/infected cells by combining modified tandem affinity chromatography and mass spectrometry analysis, then protein interaction network was established.Through RNAi and over-expressing, the function of interaction proteins will be made more clearly in virus life cycle. By Alanine-Scanning Mutagenesis, the mapped domains of NS1 protein will be evaluated in vitro and in vivo. Altogether, this project will strongly support the following basic study and disease control.

英文关键词： Japanese Encephalitis Virus；NS1 Protein；Protein-protein Interaction；reverse genetic system；Molecular Mechanism